蛋白质组学分析

血清/血浆蛋白质组分析采用 TMT™（Tandem Mass Tag™）技术（美国Thermo Scientific公司研发的一种多肽体外标记技术）。该技术采用2种、6种或10种同位素的标签，通过特异性标记多肽的氨基基团，然后进行串联质谱分析，可同时比较2组、6组或10组不同样品中蛋白质的相对含量。

技术原理：TMT™标签由三部分组成：分子量报告子、分子量标准化部分和反应基团，形成2种、6种或10种相对分子质量均等量的异位标签。

TMT™标签结构示意图

TMT™试剂通过反应基团能够高效地标记酶解后的肽段。在一级质谱图中，分子量标准化部分使任何一种TMT™试剂标记的不同样本中的同一肽段表现为相同的质荷比。在串联质谱中，可剪切臂能够优先断裂以便释放分子量报告子。每个报告子都有各自独特的分子量，并且能够在MS/MS分析中反应出所标记的多肽的样品丰度，根据报告离子的信号强度值可获得样品间相同肽段的定量信息，再经过软件处理得到蛋白质的定量信息。其基本原理与技术流程如下图所示（以4标为例）：

实验流程

仪器设备：Thermo Scientific Q Exactive

技术优势：灵敏度高：可检测出低丰度蛋白；分离能力强：可分离出酸/碱性蛋白，小于10KD或大于100KD的蛋白、难溶性蛋白等；适用范围广：适用于胞浆蛋白、膜蛋白、核蛋白、胞外蛋白、分泌蛋白等蛋白质；高通量：最多可同时对10个样品进行分析，特别适用于采用多种处理方式或来自多个处理时间的样品的差异蛋白分析；结果可靠：定性与定量同步进行，同时给出每一个组分的相对表达水平、分子量和丰富的结构信息；自动化程度高：液质联用、自动化操作、分析速度快、分离效果好。

应用领域：

1. 疾病标志物筛选

2. 分子机制研究

3. 植物抗逆研究

4. 药物作用靶点研究

5. 特殊功能蛋白质筛选

       生物信息及计算生物学研究主要是用来服务白质组学研究。我们将开发一些应用软件来处理大规模的蛋白质组学数据和进行功能性预测. 同时我们建立一个关于蛋白质磷酸化位点的网络数据库 (a web-based relational database). 这个数据库将包括磷酸化位点的功能和量化方面的信息．预计这个数据库对于预测蛋白磷酸化信息与细胞的生物学表型之间的联系起到重要的作用。