Cell Reports Medicine：对乙酰氨基酚的止痛秘密：靶向DAGLα阻断内源性大麻素合成

对乙酰氨基酚抑制二酰基甘油脂肪酶合成2-花生四烯酸甘油：对痛觉的影响

2025年5月，美国印第安纳大学等单位的相关研究人员在《Cell Reports Medicine》（IF：11.7）上发表了题为“Acetaminophen inhibits diacylglycerol lipase synthesis of 2-arachidonoyl glycerol: Implications for nociception”的研究论文，揭示了对乙酰氨基酚（APAP）通过抑制二酰基甘油脂肪酶α（DAGLα），减少了内源性大麻素2-花生四烯酸甘油（2-AG）的生成。这表明通过大麻素受体1（CB1）存在一种新的止痛机制，为APAP的作用提供了新的见解。

  研究背景：

对乙酰氨基酚（APAP）是世界范围内广泛使用的解热镇痛药。尽管APAP于1877年首次合成，但其作用机制仍出人意料地不明确。传统观点认为APAP通过选择性抑制中枢神经系统（CNS）中的环氧合酶2（COX2）发挥作用，但需要高浓度才能生效。此外，有研究提出APAP可能通过次级代谢物作用于大麻素信号系统。

内源性大麻素（eCB）信号系统由大麻素受体、亲脂性eCBs及合成与分解这些脂质信使的酶系组成。大麻素受体广泛分布于CNS及全身其他部位。多项研究已将APAP与eCB信号系统成分的激活联系起来，因此研究人员对两者之间的相互作用进行了研究。

研究人员首先通过电生理实验系统评估了APAP对自突触海马神经元模型兴奋性神经传递的直接影响。APAP浓度的增加不会改变兴奋性突触后电流（EPSC）振幅，表明APAP对该模型系统中的神经传递无直接作用。研究人员发现APAP可抑制去极化诱导的兴奋抑制（DSE），一种存在于自突触海马神经元中由CB1受体介导的逆向信号形式，APAP以浓度依赖性方式抑制DSE。APAP不改变GABA-B受体介导的Gi/o型G蛋白介导的神经传递产生泛化效应，APAP的代谢物AM404不会改变自突触神经元中的大麻素信号传导。

APAP抑制自突触海马神经元中的内源性大麻素神经可塑性

上述结果提示APAP的作用似乎是大麻素CB1受体信号传导所特有的。因此，研究人员通过外源性施用2-花生四烯酸甘油（2-AG），探究APAP是在突触前作用于CB1受体，还是通过改变2-AG的合成或释放在突触后作用于CB1 受体，结果表明APAP可能是通过抑制2-AG的合成在突触后发挥作用。

二酰基甘油脂肪酶DAGLα和β已被确定为 2-AG的主要合成酶。研究人员进一步通过过表达DAGLα的人胚胎肾细胞系（HEK-DAGLα）验证APAP可能抑制DAGL介导的2-AG合成的假设。研究人员使用1-硬脂酰基-2-花生四烯酰基-sn-甘油（S-AG，DAGL介导2-AG的合成底物）处理细胞，并与溶剂对照组比较脂质谱变化。结果显示，与对照组相比S-AG处理后的细胞2-AG、2-亚油酰甘油（2-LG）、2-油酰甘油（2 -OG）中仅2-AG水平如预期显著升高，多种酰基乙醇胺（包括花生四烯酸乙醇胺（AEA）、棕榈酰乙醇胺（PEA）、油酰乙醇胺（OEA）及亚油酰乙醇胺（LEA））水平均无变化。研究人员随后研究了APAP和DAGLα抑制剂DO34是否影响S-AG介导的2-AG和其他酰基甘油及酰基乙醇胺的增加，发现APAP及DO34使2-AG、2-OG水平显著降低，而DO34还降低了2-LG的水平。

APAP和DO34均可降低HEK-DAGLα细胞中2-AG的产生

研究人员采用脂肪酶底物检测APAP对细胞裂解液中DAGLα或DAGLβ活性的影响，结果表明APAP特异性抑制DAGLα而非DAGLβ来抑制2-AG合成。为了深入探究APAP对DAGLα介导的eCB生成的抑制作用，研究人员采用eCB生物传感器进行了实时监测。细胞实验结果进一步证实了APAP通过抑制DAGLα酶活性阻断受体激活诱导的2-AG合成。

APAP降低DAGLα活性

为了进一步了解eCBs在APAP镇痛中的作用，研究人员采用热板试验，一种涉及脊髓上镇痛通路的行为性疼痛检测方法。在小鼠实验中证实了APAP的镇痛作用对CB1存在依赖性。DAGLα抑制剂的镇痛作用也依赖于CB1。随后研究人员探究了APAP对AEA合成途径的影响，发现APAP的作用可能不依赖于NAPE - PLD所参与的AEA合成途径。

综上所述，该研究确定了在神经元模型中，APAP通过抑制eCB合成酶DAGLα来减少2 - AG的产生，进而减少CB1受体激活来发挥镇痛作用。这种效应发生时APAP的浓度处于其血浆治疗浓度范围内。这一机制可能是APAP多模式效应的一部分，其中包括直接作用和通过代谢物发挥的作用，并提示了抑制DAGLα可能是开发疼痛治疗药物的一个潜在靶点。